უჯრედის კულტურის ხშირად დასმული კითხვები

2. რა უსაფრთხოების ზომები უნდა იქნას მიღებული აღდგენისთვის თხევადი აზოტიდან უჯრედების ამოღებისას?

თხევადი აზოტის უჯრედული კრიოტუბები, რომლებიც ბოლომდე არ არის დალუქული და მათში თხევადი აზოტი ჟონავს, შეიძლება გამოიწვიოს აფეთქება, თუ კრიოტუბის ტემპერატურა მკვეთრად მოიმატებს გალღობისას.ამიტომ რეკომენდირებულია სათვალეების და დამცავი ხელთათმანების ტარება თხევადი აზოტიდან უჯრედების მოცილებისას.რეანიმაციისთვის საყინულე მილი მუდმივად უნდა შეირყევა 37°C წყლის აბაზანაში, რათა გაყინული ხსნარი მთლიანად გალღვოს 1-2 წუთის განმავლობაში.ამის შემდეგ მილის გარეთა სპირტიანი პირსახოცით გაწურეთ, შემდეგ გადაიტანეთ ულტრა სუფთა მაგიდაზე და გადაიტანეთ უჯრედები ცენტრიფუგის მილში 10 მლ კულტივირების საშუალების დამატებით, ცენტრიფუგა 1000 rpm 5-10 წუთის განმავლობაში, გადააგდეთ ზენატანი, დაამატეთ შესაბამისი რაოდენობის კულტივირების საშუალება და დაასხით კულტურის კოლბა და ინკუბაცია 5% CO2 ინკუბატორში.

3. რატომ უნდა ინახებოდეს უჯრედები თხევადი აზოტის ავზის ორთქლის ფაზაში და არა თხევად ფაზაში?

თხევადი აზოტის გაზის ფაზაში შენახული უჯრედები უფრო მეტად აღორძინდება.მაშინ, როცა თხევადი აზოტის თხევად ფაზაში, თუ ლიოფილიზაციური მილები არ არის სათანადოდ დალუქული ან აქვს გაჟონვა, უჯრედებსა და თხევად აზოტს შორის უშუალო კონტაქტმა შეიძლება ზიანი მიაყენოს უჯრედების სიცოცხლისუნარიანობას გალღობის შემდეგ.

4. სუსპენზიის უჯრედებისთვის როგორ შევცვალო კულტურის საშუალება?

სუსპენზიის უჯრედების კულტივირება შეიძლება განხორციელდეს უბრალოდ ახალი გარემოს დამატებით (თუ სივრცე საშუალებას იძლევა) ან უჯრედების გამოყოფით ძველი გარემოდან ცენტრიფუგირებით (100 xg 5 წუთის განმავლობაში) და შემდგომში დალექილი უჯრედების ხელახლა შეჩერებით ახალ გარემოში.თუმცა, შეჩერებული უჯრედების უმეტესობისთვის, უბრალოდ საშუალო მასალის დამატება უკეთესი მეთოდია.ნებისმიერ შემთხვევაში, საშუალო უნდა განახლდეს, სანამ უჯრედები მიაღწევენ ყველაზე დიდ გაჯერების სიმკვრივეს.უჯრედების გაჯერების სიმკვრივე მერყეობს 3 x 10 5-დან 2 x 10 6-მდე, უჯრედული ხაზისა და კულტურის პირობების მიხედვით (დასვენება ან მორევა, ჟანგბადის დონე და ა.შ.).უჯრედები უნდა განზავდეს უჯრედის უფრო დაბალ კონცენტრაციამდე, რათა მოხდეს საკმარისი საკვები ნივთიერებების აღდგენა, რათა შენარჩუნდეს უჯრედების ლოგარითმული ზრდა.თუ გარემო უბრალოდ შეიცვლება უჯრედის სიმკვრივის შემცირების გარეშე, უჯრედები სწრაფად ამოწურავს მას და იღუპება.თუ უჯრედები განზავებულია მათი უმცირესი სიმკვრივის ქვემოთ, ისინი შედიან ლაგის ფაზაში და გაიზრდებიან ძალიან ნელა ან მოკვდებიან.თითოეულ შეჩერებულ უჯრედულ ხაზს აქვს განსხვავებული გაჯერების სიმკვრივე და გავლის ინტერვალი, ამიტომ უჯრედების ყოველდღიური რაოდენობა არის გზა შეჩერებული უჯრედების ხაზების მონიტორინგისთვის*.

5. რა არის CO2 რეკომენდებული დონე უჯრედული კულტურისთვის?

მიუხედავად იმისა, რომ CO2 დონე უჯრედების კულტურის სისტემებში მერყეობს 0,03%-დან 40%-მდე (როგორც წესი, დაახლოებით 0,03% CO2 ატმოსფეროში), ძალიან ხშირია ჰაერში CO2-ის დამატება ან CO2-ის კონცენტრაცია 5%-დან 10%-მდე.მნიშვნელოვანია ნატრიუმის ბიკარბონატის კონცენტრაციის კორექტირება გარემოში, რათა დაბალანსდეს CO2 დონესთან გაზის ფაზაში.უჯრედები გამოიმუშავებენ CO2-ს და ზრდისა და გადარჩენისთვის საჭიროებენ მცირე რაოდენობით ნახშირმჟავას.თუ CO2 არ დაემატება და უჯრედები მრავლდებიან, შეიძლება გამოყენებულ იქნას 4 მმ (0,34 გ/ლ) უწყლო ნატრიუმის ბიკარბონატი.თუმცა, ამ დროს კულტურის კოლბის სახურავი უნდა იყოს გამკაცრებული.თუ კულტურის სისტემას ესაჭიროება 5% ან 10% CO2, გამოიყენეთ 23,5 მმ (1,97 გ/ლ) ან 47 მმ (3,95 გ/ლ) ნატრიუმის ბიკარბონატი 37°C ტემპერატურაზე, შესაბამისად, საწყისი pH დაახლოებით 7,6.ამ პირობებში, კოლბა უნდა დარჩეს თავდახურული ან პეტრის ჭურჭლის გამოყენება გაზის წონასწორობის შესანარჩუნებლად.

6. რატომ სჭირდება ზოგიერთ უჯრედს ნატრიუმის პირუვატი?რამდენი ნატრიუმის პირუვატი უნდა დავამატო გარემოს?

პირუვატი არის ორგანული მჟავის მეტაბოლიტი გლიკოლიზურ გზაზე*, რომელიც ადვილად შედის და ტოვებს უჯრედს.ამრიგად, ნატრიუმის პირუვატის დამატება გარემოში უზრუნველყოფს როგორც ენერგიის წყაროს, ასევე ნახშირბადის წყაროს ანაბოლიზმისთვის, ხელს უწყობს გარკვეული სპეციფიკური უჯრედების შენარჩუნებას, ეხმარება უჯრედების კლონირებას ან საჭიროა, როდესაც შრატში კონცენტრაცია მცირდება.ნატრიუმის პირუვატი ასევე ხელს უწყობს ფლუორესცენციით გამოწვეული ციტოტოქსიკურობის შემცირებას.ნატრიუმის პირუვატს ჩვეულებრივ ემატება საბოლოო კონცენტრაცია 1 მმ.კომერციულად ხელმისაწვდომი ნატრიუმის პირუვატის ხსნარები, როგორც წესი, არის 100 მმ შესანახი ხსნარი (100X).

ითარგმნა www.DeepL.com/Translator-ით (უფასო ვერსია).